Подсчет ретикулоцитов в крови

Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями

Подсчет ретикулоцитов в крови

Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями является на практике наиболее используемым методом подсчета количества ретикулоцитов. Это связано с тем, что метод простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, в связи с чем может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории.

см. также статьи Ретикулоциты и Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии

Принцип метода

Выявление зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками с дальнейшим подсчетом их в мазке крови.

Можно использовать один из следующих красителей:

  1. Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать 96% этанол в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски.
  2. Раствор азура I: азур I – 1 г, аммония оксалат – 0,4 г, натрия хлорид – 0,8 г, этиловый спирт 96% – 10 мл, дистиллированная вода – 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2 – 3 дня в термостат при 37° C и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать.
  3. Раствор азура II: азур II – 1 г, натрия цитрат – 5 г, натрия хлорид – 0,4 г, дистиллированная вода – 45 мл. Раствор оставляют в термостат при 37° C на 2 суток, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15 – 20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Хранят в посуде из темного стекла.

Микроскоп.

Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке.

При окраске ретикулоцитов на стекле хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из перечисленных выше красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Стеклографом маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски.

В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте. Перед проведением анализа готовят влажную камеру. Обычно для этого пользуются чашкой Петри с уложенными по краям валиками смоченной ваты или фильтровальной бумаги. Наносят каплю крови на мазок краски, готовят из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влажную камеру на 3 – 10 мин.

Затем высушивают мазки на воздухе.

Окраска ретикулоцитов в пробирке отличается при использовании разных красителей.

Метод 1 – окраска ретикулоцитов в пробирке бриллиантовым крезиловым синим

Перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1% раствора оксалата калия 4 капли раствора краски бриллиантового крезилового синего. В краску добавляют 0,04 мл крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 минут. Затем снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 2 – окраска ретикулоцитов в пробирке азуром II

В пробирку помещают 0,05 мл раствора краски азур II и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20 – 30 минут. Снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 3 – окраска ретикулоцитов в пробирке азуром I

В пробирку помещают 0,3 – 0,5 мл раствора краски азур I и 5 – 6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку закрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 1 – 1,5 часа (ретикулоциты окрашиваются лучше при экспозиции 1,5 – 3 часа). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

В настоящее время в продаже имеются готовые красители для ретикулоцитов заводского изготовления. Окраска ретикулоцитов с их помощью производится согласно прилагаемой инструкции.

Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом. В мазке ретикулоциты и эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в ретикулоцитах – в синий (при окраске азуром II и бриллиантовым крезиловым синим) или синевато-фиолетовый цвет (при окраске азуром I).

Фотографии ретикулоцитов:

Окраска ретикулоцитов
Ретикулоциты
Ретикулоциты
Ретикулоциты
Reticulocytes

Находят поля зрения, где эритроциты располагаются раздельно. В этих полях зрения необходимо подсчитать не менее 1000 эритроцитов и отметить среди них количество эритроцитов, содержащих зернисто-нитчатую субстанцию. Большая точность получается при подсчете на 2000 – 3000 эритроцитов.

В связи с тем, что в поле зрения располагается большое количество эритроцитов, что затрудняет подсчет, необходимо ограничить (уменьшить) поле зрения.

Для этого можно воспользоваться либо специальным окуляром, в котором можно уменьшить поле зрения до требуемых размеров, либо воспользоваться специальным «окошком» (из бумаги вырезают круг диаметром несколько меньше окуляра, в центре круга вырезают небольшой ромбик и вставляют полученное окошко в окуляр).

Количество подсчитанных ретикулоцитов выражают на 100 (в процентах) или на 1000 (в промилле) эритроцитов.

Пример: При подсчете в мазке 1000 эритроцитов выявлено, что 15 эритроцитов из 1000 имеют зернисто-сетчатую субстанцию той или иной степени, то есть являются ретикулоцитами. Следовательно, количество ретикулоцитов в данном случае составляет 1,5% или 15‰.

Клиническое значение определения количества ретикулоцитов.

  • Справочник “Лабораторные методы исследования в клинике” под редакцией Меньшикова В. В. – Москва, “Медицина”, 1987 г
  • Любина А. Я., Ильичева Л. П. и соавторы – “Клинические лабораторные исследования” – Москва, “Медицина”, 1984 г.

Метод подсчета количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии отличается простотой и требует немного времени, более точен по сравнению с обычным методом, так как при люминесцентной микроскопии обнаруживаются мельчайшие зерна сетчато-нитчатого вещества.

Раздел: Гемоцитология

Читать

Ретикулоциты – молодые эритроциты, образующиеся после потери нормобластами ядер. Характерной особенностью ретикулоцитов является наличие в их цитоплазме зернисто-нитчатой субстанции (ретикулума), представляющей агрегированные рибосомы и митохондрии.

Раздел: Гемоцитология

Читать

Тельца Жолли (тельца Хауэлла-Жолли) – мелкие круглые фиолетово-красные включения размером 1 – 2 мкм, встречаются по 1 (реже по 2 – 3) в одном эритроците. Предсталяют собой остаток ядра после удаления его РЭС. Выявляются при интенсивном гемолизе и “прегрузке” РЭС, после спленэктомии, при мегалобластной анемии..

Раздел: Гемоцитология

Читать

Цитохимическое исследование липидов основано на применении красящих веществ, растворяющихся в жирах (судан III, судан IV, черный судан и др.). Для выявления нейтрального жира пользуются суданом III, окрашивающим жир в оранжевый цвет. Липоиды выявляются лучше суданом черным (черное окрашивание).

Раздел: Цитохимия

Читать

Метод Нечипоренко в отечественной лабораторной диагностике является наиболее распространенным методом количественного определения форменных элементов в моче.

Этот метод наиболее прост, доступен любой лаборатории и удобен в амбулаторной практике, а также имеет ряд преимуществ перед другими известными количественными методами исследования осадка мочи.

По методу Нечипоренко определяют количество форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров) в 1 мл мочи.

Раздел: Анализ мочи

Читать

Источник: http://www.clinlab.info/Hemocytology/Reticulocytes-counting-49

Ретикулоциты

Подсчет ретикулоцитов в крови

Ретикулоциты — незрелые красные кровяные тельца, которые только под влиянием специфического гормона трансформируются в полноценные эритроциты. В человеческом организме выполняют несколько важных функций — отражают функционирование костного мозга, переносят небольшое количество кислорода с кровотоком.

Их уровень может как снижаться, так и повышаться, что указывает на протекание какого-либо заболевания. Практически не существует физиологических источников нарушения.

Характерные клинические признаки неспецифичны и слабо выражены, могут полностью отсутствовать или маскироваться под симптоматику базового заболевания.

Подсчет ретикулоцитов осуществляется во время общеклинического анализа крови, а расшифровка результатов проводится врачом-гематологом. Для поиска этиологического фактора необходимы данные дополнительных лабораторно-инструментальных обследований.

Схема коррекции уровня ретикулоцитов проводится индивидуально, но в целом основывается на том, чтобы вылечить основную патологию.

Норма ретикулоцитов в крови может измеряться в нескольких единицах — в процентах и в промилле. На вариабельность допустимых значений будут оказывать влияние несколько факторов — индекс может отличаться по возрасту и половой принадлежности.

Следующая таблица отображает нормальные показатели в процентах:

Возрастная категорияНорма (%)
Дети до года0,3–1,5
1–6 лет0,3–1,2
6–12 лет0,2–1,2
12–16 лет0,2–1,1
Мужчины0,8–1,2
Женщины0,2–2

Норма ретикулоцитов в промилле:

Возрастная категорияНормальный уровень (‰)
Дети до года3–15
1–6 лет3–12
6–12 лет2–12
12–16 лет2–11
Мужчины8–12
Женщины2–10

Именно в соответствии с такими параметрами говорят про повышение или понижение подобных составных элементов крови. В первом случае патологическое состояние будет носить название ретикулоцитоз, а во втором — ретикулоцитопения. Каждое из отклонений имеет свои причинные факторы.

Повышение уровня ретикулоцитов в крови характерно для:

  • сильных внутренних кровотечений;
  • онкологических процессов;
  • заболеваний кроветворной системы, среди которых талассемия и полицитемия;
  • анемии гемолитической разновидности;
  • острой длительной гипоксии;
  • широкого спектра инфекций;
  • различных болезней воспалительного характера;
  • гемолиза — состояние, при котором происходит разрушение красных кровяных телец внутри организма;
  • восстановления функционирования костного мозга при длительной химиотерапии или лучевом лечении;
  • злоупотребления никотином;
  • специфических условий труда — основную группу риска составляют лица, вынужденные работать на большой высоте.

Ретикулоциты в крови у женщин могут повышаться во время вынашивания ребенка, что считается нормальным явлением.

Причины сниженной продукции ретикулоцитов:

  • различные разновидности анемии, в частности железодефицитная или апластическая;
  • заболевания почек;
  • проблемы в работе щитовидной железы;
  • онкологическое поражение костного мозга или метастазирование рака из других очагов в эту область;
  • хронический алкоголизм;
  • длительная химиотерапия или лучевая терапия;
  • уремия;
  • инфекции в хронической форме.

Понижены или повышены ретикулоциты могут быть на фоне длительного или бесконтрольного применения некоторых лекарственных препаратов.

Этапы созревания ретикулоцитов

На снижение уровня подобного компонента крови влияют:

  • «Азатиоприн»;
  • «Хлорамфеникол»;
  • «Метотрексат»;
  • «Карбамазепин»;
  • сульфаниламиды;
  • цитостатики;
  • антибиотики;
  • противоэпилептические средства;
  • иммунодепрессанты.

Повышение ретикулоцитов происходит при приеме:

  • «Леводопа»;
  • витаминных комплексов В12;
  • жаропонижающих препаратов;
  • эритропоэтинов;
  • железосодержащих медикаментов.

Ретикулоциты в крови делятся на несколько категорий, которые отличаются по расположению базофильного вещества:

  • ядерные клетки — БВ имеет вид венчика или ядра;
  • клубкообразные частицы — БВ внешне напоминает клубок;
  • полносетчатые клетки — базофильное вещество выражено как густая сетка;
  • неполносетчатые формы — БВ как отдельные нити;
  • пылевидные частицы — базофильная субстанция выражена в мелких зернышках.

Существует фракция незрелых ретикулоцитов, которые имеют собственное обозначение в анализе — IRF. Бывают:

  • низкой флюоресценции или LRF — от 83 до 97 %;
  • средней флюоресценции или MRF — 2,9–15,9 %;
  • высокой флюоресценции или HRF — от 0 до 1,7 %.

Высокие или низкие ретикулоциты могут вовсе никак не проявляться. Наиболее часто характерные внешние проявления скрываются за симптоматикой базового заболевания.

Когда у мужчин и женщин такие вещества понижены, могут быть следующие симптомы:

  • бледность кожи и слизистых;
  • колебания кровяного тонуса и частоты сердечного ритма;
  • похолодание кожных покровов;
  • приступы сильнейшего головокружения;
  • частая смена настроения;
  • одышка;
  • шум в ушах;
  • упадок сил;
  • незначительное снижение остроты зрения;
  • отсутствие аппетита;
  • заторможенность действий.

На то, что ретикулоциты повышены, указывают:

  • частые головные боли;
  • выделение большого количества липкого пота;
  • слабость и быстрая утомляемость;
  • мышечные и суставные боли;
  • сонливость;
  • покраснение кожных покровов;
  • возрастание АД;
  • учащение сердцебиения;
  • предобморочное состояние.

Наличие и интенсивность выраженности таких признаков будет сугубо индивидуальным. В любом случае при возникновении подобных проявлений необходимо проконсультироваться у клиницистов.

Чтобы установить индекс незрелых красных кровяных телец, проводят общий анализ крови, который предполагает забор биологического материала либо из пальца, либо из вены.

Чтобы в мазке крови было обнаружено реальное содержание ретикулоцитов, от пациента требуется соблюдение несложных подготовительных мероприятий.

Ретикулоциты в мазке крови

Подготовка перед тем, как сдавать анализ крови на ретикулоциты, включает:

  1. Полный отказ от еды в день исследования. С момента последнего приема пищи должно пройти не менее 8 часов. Людям разрешается лишь пить очищенную воду без газа.
  2. Исключение приема каких-либо медикаментов. Кровь следует сдавать до начала приема лекарств или через 2–3 недели после отмены препарата. Во втором случае стоит проинформировать лечащего врача, какое именно вещество использовалось для лечения.
  3. За сутки до такой лабораторной диагностики из меню убирают спиртные напитки, жирные, острые и жареные блюда. Следует свести к минимуму физическую активность.

Расшифровать то, что показывают результаты исследования, может только гематолог, который передает полученные данные лечащему врачу. Стоит отметить, что для выявления причины полученной в результате проведения анализа информации будет недостаточно — необходимо комплексное обследование пациента.

Первичная диагностика включает мероприятия, проводимые лично клиницистом:

  • ознакомление с историей болезни — для поиска основного заболевания, которое может иметь острую или хроническую форму протекания;
  • сбор и анализ жизненного анамнеза — сюда относят информацию касательно пристрастия к вредным привычкам и приема каких-либо лекарственных веществ;
  • тщательный физикальный осмотр больного с обязательной оценкой состояния кожных покровов;
  • детальный опрос пациента — для получения полной информации относительно клинической картины.

В дополнение человеку могут быть назначены иные лабораторные исследования, широкий спектр инструментальных процедур и консультации у других специалистов.

Если ретикулоциты в анализе крови повышены, понижены или полностью отсутствуют, нужно начать борьбу с главным провоцирующим патологическим фактором. Лечение может быть консервативным или операбельным, чаще имеет комплексный подход.

Иногда для восстановления нормы вполне достаточно:

  • отказаться от приема лекарств или заменить их аналогами;
  • рационализировать питание;
  • отказаться от вредных привычек.

Нормализация ретикулоцитов проводится индивидуально, но общими направлениями в коррекции будут:

  • медикаментозная терапия;
  • переливание крови;
  • диета.

После предварительной консультации с лечащим врачом можно использовать народные рецепты в домашних условиях.

Для предупреждения того, что ретикулоциты отклонились от нормы, необходимо лишь соблюдать несколько несложных рекомендаций.

Среди профилактических мер стоит выделить:

  • ведение здорового образа жизни;
  • полноценное и сбалансированное питание;
  • предупреждение проникновения в организм ядовитых веществ;
  • избегание влияния стрессовых ситуаций и облучения;
  • прием лекарств, назначенных клиницистом;
  • регулярное прохождение полного обследования в медицинском учреждении.

Прогноз зависит от патологического первоисточника. Это объясняется тем, что каждое из провоцирующих заболеваний обладает рядом собственных осложнений и последствий, которые могут закончиться летальным исходом.

Источник: https://MedAnaliz.pro/krov/retikulotsity

Что показывают ретикулоциты в анализе крови

Подсчет ретикулоцитов в крови

Ретикулоциты являются предшественниками красных кровяных телец с остатками рибонуклеиновых кислот (РНК). Они циркулируют в периферической крови в небольшом количестве.

Образуются эти клетки из нормобластов в костном мозге, где находятся около двух дней. Затем незрелые эритроциты попадают в кровь.

Под воздействием гормона эритропоэтина, который вырабатывается почками и выбрасывается в кровь, они становятся зрелыми эритроцитами. Это процесс занимает примерно два дня.

При ускорении образования красных клеток количество ретикулоцитов в крови растет, при замедлении – уменьшается. Механизм увеличения ретикулоцитов таков, что при усиленном разрушении эритроцитов их уровень может резко возрасти и составить половину всех красных клеток. Кроме того, в крови могут появиться предшественники ретикулоцитов – нормобласты.

Таким образом, активность этих клеток показывает, с какой скоростью в костном мозге идет образование эритроцитов. Фракция ретикулоцитов в крови отражает свойства костного мозга, в частности его регенеративные способности.

Что собой представляют и какие функции выполняют

Это безъядерные клетки розоватого цвета с синеватым отливом. При микроскопическом исследовании в них видны внутриклеточные структуры, которых нет у эритроцитов. Это нитевидные и гранулярные образования: митохондрии, остатки РНК, другие органеллы.

Ретикулоциты выполняют те же функции, что и эритроциты, то есть переносят кислород, но менее эффективно.

Норма

Норма ретикулоцитов изменяется с возрастом: у грудных детей их уровень выше, чем у взрослого человека. После 12 лет их количество зависит от пола. Это связано с началом менструаций у девочек и ежемесячными потерями крови.

Этот показатель в общем анализе крови измеряется в процентах от общего числа красных клеток (обозначение – RTC). Нормы ретикулоцитов представлены в таблице:

У женщинУ мужчин
У новорожденного ребенка0,15-1,50,15-1,5
2 недели0,45-2,10,45-2,1
1-2 месяца0,25-0,90,25-0,9
6 месяцев0,2-10,2-1
До 6 лет0,2-0,70,2-0,7
От 6 до 12 лет0,2-1,30,2-1,3
После 12 лет0,12-2,050,24-1,7

Как проводится

Определение уровня ретикулоноцитов не входит в клинический анализ крови и назначается дополнительно, если есть показания. Их количество подсчитывается при микроскопическом исследовании мазка крови. Суть метода заключается в выявлении клеток с зернисто-сетчатыми субстанциями, которые видны при окрашивании специальными щелочными красителями.

Для анализа на ретикулоциты сдают кровь из пальца

Это самый простой, доступный и малозатратный метод, который до сих пор применяется в лабораториях, хотя он менее точен, чем автоматический подсчет. Для анализа нужен краситель (используют три разных вида), микроскоп, пробирка или стекло. Сегодня используют готовые реагенты, например, набор Диагем. Окрашивание на стекле и в пробирке имеют отличия.

На стекле

Стекло моют, просушивают и нагревают с помощью горелки. На стекло наносят каплю одного из трех красителей с помощью стеклянной палочкой и делают мазок краски, используя шлифовальное стекло.

На мазок краски наносят каплю крови и делают тонкий мазок. На 5-10 минут помещают стекло во влажную камеру (обычно это чашка Петри, по краям которой уложены валики смоченной ваты).

Затем мазки сушат на воздухе.

В пробирке

Окрашивание производится по-разному, в зависимости от вида красителя. В целом процедура заключается в помещении краски в пробирку, добавлении к ней капли крови и перемешивании. Смесь оставляют на некоторое время (от 20 минут до 3 часов в зависимости от используемого реактива), затем перемешивают еще раз и делают мазки.

Подсчет

Готовые мазки исследуют под микроскопом. Эритроциты и ретикулоциты имеют желтовато-зеленоватую окраску, зернистая структура ретикулоцитов синего или синевато-фиолетового цвета. Посчитанные клетки выражают в промилле или в процентах.

Вид ретикулоцитов на стекле в мазке после окрашивания

Например: в мазке выявлено 20 клеток с зернисто-сетчатой структурой на 1000 эритроцитов. То есть содержание ретикулоцитов составляет 20 промилле или 2 процента.

Если ретикулоциты понижены

Если количество предшественников красных клеток ниже нормы, это означает, что нарушена работа костного мозга или почек. При заболевании почек уровень ретикулоцитов снизится ненамного.

Еще статья:Норма тромбоцитов у мужчин

Резкое падение этих клеток (даже до нуля) характерно для заболеваний, которые сопровождаются быстрым разрушением эритроцитов. Это происходит при некоторых заболеваниях крови, в частности при анемиях:

  • B12-дефицитной,
  • апластической,
  • гипопластической.

Степень тяжести анемий показывает индекс продукции ретикулоцитов, который равен уровню RCT, умноженному на гематокритное число.

Система кроветворения истощается при злоупотреблении спиртными напитками. Алкоголь приносит тройной вред:

  • угнетает работу костного мозга;
  • подавляет функции почек;
  • находящиеся в алкоголе токсичные вещества при попадании в кровоток уничтожают эти клетки.

Активность производства ретикулоцитов может снижаться при злокачественных опухолях с метастазами в костный мозг, аутоиммунных патологиях системы кроветворения, микседеме, лучевой и химиотерапии.

К снижению уровня ретикулоцитов может привести прием некоторых препаратов:

  • цитостатиков;
  • некоторых антибиотиков;
  • противоэпилептических лекарств;
  • иммунодепрессантов.

Если ретикулоциты повышены

Повышение уровня ретикулоцитов может быть как плохим, так и хорошим признаком.

Рост числа этих клеток происходит при следующих патологиях:

  • онкологических заболеваниях с метастазированием в костный мозг (их уровень может упасть, это зависит от того, какой отдел мозга поражен);
  • гемолитической анемии;
  • талассемии;
  • кислородном голодании;
  • малярии.

Повышенные ретикулоциты показывают, что лечение фолиеводефицитной или железодефицитной анемии проходит успешно. Через неделю после начала терапии усиливается производство этих клеток, их уровень в крови растет, и они трансформируются в зрелые эритроциты.

Еще одна причина повышенных ретикулоцитов – значительные кровопотери, при которых их количество увеличивается в 3-6 раз. Рост уровня этих клеток, с одной стороны, можно считать хорошим признаком, поскольку это говорит об интенсивном образовании кровяных клеток при их потере. С другой стороны, кровотечение может быть плохим признаком, поэтому его причины нужно выяснить и устранить.

Повышают ретикулоноциты следующие медикаменты:

  • витамин B12;
  • жаропонижающие;
  • эритропоэтины;
  • железосодержащие.

Когда назначают

Анализ крови на ретикулоноциты показан в следующих случаях:

  • Если требуется контроль лечения анемических состояний препаратами железа и фолиевой кислоты, витамином B12.
  • Для контроля восстановления костного мозга после его трансплантации.
  • При подозрении на разрушение эритроцитов.
  • Для оценки эффективности кроветворения.

Ретикулоноциты при беременности

У беременных женщин, как правило, наблюдается небольшое увеличение содержания ретикулоноцитов. Дело в том, что у будущих мам увеличивается общий объем крови и происходит это не за счет кровяных клеток, а за счет плазмы.

В «жидкой» крови беременных уровень гемоглобина снижен, развивается анемия, поэтому активизируется процесс кроветворения.

Незначительный рост уровня ретикулоноцитов считается нормальным явлением и говорит о физиологической адаптации, хотя в идеале число этих клеток во время вынашивания плода не увеличивается.

Заключение

Определение уровня ретикулоноцитов не входит в стандартный анализ крови, при котором определяют основные показатели (эритроциты, тромбоциты, лейкоциты), и требуется только в случае необходимости. Диагностическое значение исследования заключается в основном в оценке эффективности лечения анемий.

Источник: https://icvtormet.ru/krov/chto-pokazyvayut-retikulocity-analize

УмныйКардиолог
Добавить комментарий