Современные методы определения группы крови

Как определить группу крови — популярные методы

Современные методы определения группы крови

Наверняка каждый хотя бы раз в жизни сталкивался с анализом на определение группы крови. О том какие существуют способы определения группы крови и каким из них лучше всего проводить тест на принадлежность к тому или иному виду – тема сегодняшней статьи.

Зачем проводят исследование на группу крови?

В современной гематологии, под группой крови понимают специфический набор антигенов, расположенных на поверхности эритроцитов, определяющий их специфичность. Данных антигенов существует огромное количество (обычно, используется таблица групп со всевозможными антигенами), однако, во всем мире признана классификация крови по системе АВ0 и резус-фактору.

Группа крови обязательно определяется при подготовке к любым операциям. В число обязательных контингентов, в которых проводится определение группы крови, входят военные, работники силовых структур и внутренних органов.

Данное мероприятие необходимо, так как в случае развития ургентного состояния (угрожающего жизни) может возникнуть необходимость в переливании, когда не будет времени проводить анализ и тест на ее совместимость с донорской.

Определение групп крови стандартными методами

Существует множество различных техник, но в клинических лабораториях чаще всего используют методику стандартных сывороток. Как определить группу крови по стандартным сывороткам?

Этот метод применяется для определения антигенов системы АВ0. Стандартная изогемагглютинирующая сыворотка имеет в своем составе набор специфических антител к поверхностным молекулам эритроцитов.

При наличии антигена, на которое распространяется действие антител, происходит образования комплекса антиген-антитело, что провоцирует запуск каскада иммунных реакций.

Ее результат — агглютинация эритроцитов, на основании характера агглютинации судят можно сделать заключение об отнесении образца к той или иной группе крови.

Стандартные сыворотки готовят из донорской крови по определенной системе — путем выделения плазмы с присутствующими в ней антителами и ее последующего разведения. Разведение проводят с помощью изотонического раствора натрия хлорида.

Разведение проводится следующим образом – в пробирку с 1 мл 0.9 процентного раствора пищевой соли добавляют 1 мл плазмы и тщательно перемешивают раствор.

После, пипеткой отбирают 1 мл полученного раствора плазмы и добавляют его во вторую пробирку, содержащую изотонический раствор. Таким образом, достигается разведение плазмы в соотношении 1:256.

Использование других разведений может привести к появлению диагностической ошибки.

Техника проведения исследования следующая – на специальный планшет для определения группы крови помещают по одной капле (общим объемом около 0.

1 мл) каждой сыворотки в область с соответствующей пометкой (используются сыворотки двух образцов, среди которых один является контрольным, а второй используется для исследования).

После этого, возле каждой капли сыворотки помещают исследуемый образец (0.01 мл), после чего он по отдельности смешивается с каждым видом диагностикума.

Через некоторое время (в среднем, около 5 минут) проводят анализ полученных результатов с описанием характера произошедшей реакции:

  • если в исследуемом образце происходит агглютинация – тест положительный;
  • если агглютинации нет, то реакция отрицательна.

Проще говоря, наличие агглютинации говорит о том, что в крови имеется необходимый набор агглютиногенов, и если она произошла, значит кровь принадлежит к той группе, антитела к которой содержатся в сыворотке. На основании полученных результатов строится таблица или схема, которая визуально отображает результаты.

Таблица результатов теста на группу крови с применением стандартных сывороток

Метод перекрестной реакции

Данная техника заключается в определении агглютиногенов с помощью цоликлонов или стандартных сывороток с параллельным выявлением агглютининов при помощи эталонных эритроцитов.

Методика проведения практически не отличается от определения группы крови при помощи сывороток, однако, есть некоторые дополнения.

На планшетку ниже нанесенных сывороток добавляют по одной малой капле стандартных эритроцитов. После этого, из пробирки, содержащей прошедшую через центрифугу кровь пациента, извлекают с помощью пипетки плазму, которую добавляют к стандартным эритроцитам, а находящиеся на дне ее эритроциты вносят в стандартную сыворотку.

Также как и при методике стандартных сывороток, полученные результаты оценивают через несколько минут после начала реакции. При наличии агглютинации в стандартных сыворотках судят о наличии агглютининов системы АВ0, а при развитии реакции плазмы со стандартными эритроцитами – об имеющихся агглютиногенах.

Результаты исследования с применением сывороток и стандартных эритроцитов

Перекрестный метод получил широкое распространение благодаря тому, что он предотвращает основные диагностические ошибки при определении крови стандартными методиками.

Определение группы цоликлонами

К использованию цоликлонов прибегают при невозможности определения антигенов системы АВ0 при помощи стандартных сывороток.

Цоликлоны – специфические антитела, полученные путем гибридизации их в живом организме (обычно, используются цоликлоны, полученные от мышей путем модификации В-лимфоцитов). Характерной их особенностью является развитие иммунной реакции между цоликлоном и антигеном А или В, расположенном на поверхности мембраны эритроцита.

Алгоритм использования моноклональных антител следующий: на планшетку наносится по одной крупной капле раствора цоликлонов (обязательно следует пометить, где и какие цоликлоны находятся). После этого, к сыворотке добавляют по одной капле исследуемой крови и оценивают полученные результаты через несколько минут.

Флаконы с различными цоликлонами

Тест должен проводиться в специально созданных условиях с соблюдением температурного режима и влажности (перед тем, как провести данный анализ, необходимо убедиться в пригодности цоликлонов).

Тест считается положительным, если в исследуемом образце произошла агглютинация эритроцитов (т.е. прошла реакция между антителом и антигеном).

Если положительный результат наблюдается в двух каплях, судят о принадлежности образца к IV группе. Если же наоборот, реакции не произошло ни в одном образце, то группа крови предположительно I.

Ошибки при определении крови данной методикой встречаются редко.

Экспресс-методика “Эритротест”

Несмотря на то, что общепринятые методики определения групповой принадлежности крови повсеместно распространены, в настоящее время широко внедряются в медицинскую и лабораторную практику экспресс-методы определения группы крови. Одним из них является “Эритротест”.

Комплект для определения группы крови “Эритротест-группокарт” состоит из следующих компонентов:

  • универсальная планшетка с пятью лунками для проведения определения группы по системе АВ0 и ее резус-принадлежности;
  • скарификатор для получения образца для исследования;
  • чистая пипетка с помощью которой проводят набор растворов;
  • стеклянные палочки, использующиеся для перемешивания образцов.

Все перечисленное оснащение необходимо для правильного проведения экспресс диагностики.

Данная методика позволяет проводить определение группы крови и резус-фактора в любых условиях, особенно если нет возможности использовать классические методы.

Процесс проведения анализа с использованием методики «Эритротест»

В лунках планшетки находятся цоликлоны к поверхностным антигенам (цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ), а также к основному антигену, обуславливающему наследование резус-фактора (цоликлон анти-D). В пятой лунке находится контрольный реагент, позволяющий предотвратить ошибки и правильно провести анализ на групповую принадлежность.

Для оценки полученных результатов используется специальная таблица, в которой перечислены всевозможные результаты исследования.

Источник: https://redkrov.ru/group/kak-opredelit-gruppu-krovi.html

Понятие о группах крови

Современные методы определения группы крови

Группы крови системы АВ0

Группы крови системы АВ0 были открытыв 1900 году К.Ландштейнером, которыйсмешивая эритроциты одних лиц с сывороткойкрови других лиц, обнаружил, что приодних сочетаниях кровь свертывается,образуя хлопья (реакция агглютинации),а при других нет. На основании этихисследований Ландштейнер разделилкровь всех людей на три группы: А, В и С.В 1907 году была обнаружена еще одна группакрови.

Было установлено, что реакция агглютинациипроисходит при склеивании антигеноводной группы крови (их назвалиагглютиногенами), которые находятся вкрасных кровяных тельцах – эритроцитахс антителами другой группы (их назвалиагглютининам), находящимися в плазме -жидкой части крови. Разделение кровипо системе АВ0 на четыре группы основанона том, что кровь может содержать илине содержать антигены (агглютиногены)А и В, а также антитела (агглютинины) α(альфа или анти-А) и β (бета или анти-Б).

Первая группа крови – 0 (I)

I группа – не содержит агглютиногенов(антигенов), но содержит агглютинины(антитела) α и β. Она обозначается 0 (I).Так как эта группа не содержит инородныхчастиц (антигенов), то ее можно переливатьвсем людям. Человек с такой группойкрови является универсальным донором.

Вторая группа крови А β (II)

II группа содержит агглютиноген (антиген)А и агглютинин β (антитела к агглютиногенуВ). Поэтому ее можно переливать толькотем группам, которые не содержат антигенВ – это I и II группы.

Третья группа крови Вα (III)

III группа содержит агглютиноген (антиген)В и агглютинин α (антитела к агглютиногенуА). Поэтому ее можно переливать толькотем группам, которые не содержат антигенА – это I и III группы.

Четвертая группа крови АВ0 (IV)

IV группа крови содержит агглютиногены(антигены) А и В, но содержит агглютининов(антител). Поэтому ее можно переливатьтолько тем, у кого такая же, четвертаягруппа крови. Но, так как в крови такихлюдей нет антител, способных склеитьсяс вводимыми извне антителами, то имможно переливать кровь любой группы.Люди с четвертой группой крови являютсяуниверсальными реципиентами.

Группы крови посистеме АВО

Методика определения групп крови

Групповая принадлежность крови посистеме АВО определяется при помощиреакции агглютинации. В настоящее времясуществует три способа опреде­лениягрупп крови по системе АВО:

– по стандартным изогемагглютинирующимсывороткам;

– с помощью моноклональных антител(цоликлонов анти-А и анти-В).

Определениегрупп крови по стандартнымизогемагглютинирующим сывороткам

Суть метода сводится кобнаружению в испыту­емой кровигрупповых антигенов А и В с помощьюстандартных сывороток. Для этих целейиспользу­ется реакция агглютинации.Пробу нужно делать в помещении с хорошимосвещением при темпера­туре 15-25° С.

Для проведения пробынеобходимы: – Стандартные изогемагглютинирующиесыворотки групп О (I),А (II),В (III)и АВ (IV)двух различных се­рий. Сыворотки дляопределения групп крови изготав­ливаютиз донорской крови в специальныхлаборато­риях. Хранятся сыворотки вхолодильнике при темпе­ратуре 4 – 8°С.

Срок годности сыворотки указываютна этикетке. На этикетке также указываетсятитр (то мак­симальное разведениесыворотки, при котором может наступитьреакция агглютинации), который долженбыть не ниже 1: 32 (для сыворотки В (III)- не ниже 1:16 /32).

Сыворотка должна бытьпрозрачной, без при­знаков гниения.Стандартные сыворотки для удобстваподкрашивают в определенный цвет: О (I)- бесцветная (серая), А (II)- синяя, В (III)- красная, АВ (IV)- ярко-желтая.

Эти цвета сопутствуютвсем этикеткам на пре­паратах крови,имеющих групповую принадлежность(кровь, эритроцитная масса, плазма идр.).

– Белые фарфоровые или эмалированныетарел­ки или другие пластинки сосмачиваемой поверх­ностью, маркированные,согласно группам крови.

— Изотонический раствор хлорида натрия.

— Иглы, пипетки, стеклянные палочки(предмет­ные стекла).

Техника проведения реакции.

1. Под соответствующимиобозначениями груп­пы крови на тарелку(пластинку) наносят сыворот­ку I,II,IIIгрупп в объеме 0,1 мл (одна большая каплядиаметром около 1 см).

Чтобы избежатьоши­бок, наносят две серии сывороток,поскольку одна из серий может иметьнизкую активность и не дать четкойагглютинации.

Таким образом, получается6 капель, образующих два ряда по трикапли в сле­дующем порядке слеванаправо: 0 (I),А (II),В (III).

2. Кровь для исследований берут из пальцаили из вены.

Сухой стеклянной палочкойна пластину в 6 точек последовательнопереносят 6 капель иссле­дуемой кровивеличиной примерно с булавочную го­ловку0,01 мл (маленькая капля), каждую рядом скаплей стандартной сыворотки.

Причемколичество сыворотки должно в 10 разпревышать количество исследуемой крови.Затем их осторожно переме­шиваютмежду собой стеклянными палочками сза­кругленными краями.

Возможна и более простая методика: натарел­ку наносится одна большая каплякрови, потом ее забирают оттуда уголкомпредметного стекла и переносят каждуюкаплю сыворотки, аккуратно перемешиваяее с последней. При этом кровь каж­дыйраз берут чистым уголком стекла, следяза тем, чтобы капли не смешивались.

3. Смешав капли, тарелкупериодически покачи­вают. Агглютинацияначинается в течение первых 10-30 секунд.Но наблюдение следует вести не ме­нее5 минут, так как возможна более поздняяагглю­тинация, например с эритроцитамигруппы А2(II).

4. В те капли, где произошла реакция,добавляют по одной капле изотоническогораствора хлорида натрия, после чегооценивают результаты реакции.

Реакция агглютинации может бытьположитель­ной или отрицательной

При положительной реакции в течениепервых 10-30 секунд наблюдают в смесивидимые невоору­женным глазом мелкиекрасные зернышки (агглю-тинаты), состоящиеиз склеенных эритроцитов. Мел­киезернышки постепенно сливаются в болеекруп­ные зерна или даже в хлопьянеправильной формы. При отрицательнойреакции капля остается равно­мерноокрашенной в красный цвет.

Результаты реакций двух серий в капляхс сыво­роткой одной и той же группыдолжны совпадать.

Принадлежность исследуемой крови ксоответству­ющей группе определяютпо наличию или отсутствию агглютинациипри реакции с соответствующимисы­воротками.

Если все сыворотки далиположительную реакцию, значит, испытуемаякровь содержит оба агглютиногена – А иВ. Но в таких случаях, чтобы исключитьнеспецифическую реакцию агглютинации,следует провести дополнительноеконтрольное исследование испытуемойкрови со стандартной сывороткой группыАВ (IV).

Определение групп крови моноклональнымиантителами

Для определения групп крови этим способомиспользуют моноклинальные антитела,которые по­лучают с помощью гибридомной,биотехнологии.

Гибридома – это клеточный гибрид,образованный путем слияния клеткикостного мозга (миеломы) с иммуннымлимфоцитом, который синтезируетспе­цифические моноклональныеантитела. Гибридома обладает способностьюк неограниченному росту, ха­рактернадля опухолевой клетки и присущейлим­фоциту способностью синтезироватьантитела.

Разработаны стандартные реагенты-моноклональныеантитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В,при­меняемые для определенияагглютиногенов эритроци­тов. Цоликлоныпредставляют собой лиофилизированныйпорошок красного (анти-А) и синего(анти-В) цвета, который разводятизотоническим раствором хлорида натриянепосредственно перед пробой.

Техника проведения.

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят набелый планшет по одной большой капле(0,1 мл) под соот­ветствующими надписями:анти-А или анти-В. Ря­дом с каплямиантител следует нанести по одноймаленькой капле исследуемой крови.После переме­шивания компонентовнаблюдают за реакцией агг­лютинациив течение 2-3 минут. Оценка результа­товочень проста.

Определение групповойпринадлежности крови может сопровождатьсяошибками, которые ведут к неправильнойтрактовке результатов.

Можно выде­литьтри основные группы ошибок: ошибки,свя­занные с низким качеством реагентов;техничес­кие ошибки; ошибки, связанныес особенностями Схема оценки результатовопределения групп крови спомощьюмоноклональных антител(цоликлоныанти-А и анти-В)исследуемойкрови.

Первых двух можно избежать, строгособлюдая описанные выше требования ксыво­ротке, условиям проведенияреакции и др.

Третья группа связана сявлением неспецифической панагглютинации(феномен Томсена), сущность которогосостоит в том, что сыворотка при комнатнойтемпера­туре дает агглютинацию совсеми эритроцитами, даже со своимисобственными (аутоагглютинация), аэрит­роциты в то же время даютагглютинацию со всеми сыворотками, дажес сывороткой группы АВ. Подоб­ноеявление описано при ряде заболеваний:болезнях крови, спленомегалии, циррозепечени, инфекционных заболеваниях идр. Описана также панагглютинация иаутоагглютинация у здоровых людей.

Явление панагглютинации и аутоагглютинациинаблюдается только при комнатнойтемпературе. Если определение групповойпринадлежности про­водить притемпературе 37° С, они исчезают.

Нужно строго помнить, что во всех случаяхне­четкого или сомнительногскрезультатаследует про­вести повторное определениегрупп крови при по­мощи стандартныхсывороток других серий, а так­жеперекрестным способом.

Источник: https://studfile.net/preview/4027103/page:4/

Определение группы крови: цоликлоны, стандартные сыворотки и перекрестный способ

Современные методы определения группы крови

Определение группы крови и резус-фактора делятся на два способа:

Экспресс-диагностика (первичное определение группы крови и Rh-фактора) не учитывает антигены Келл, не говоря уже про другие системы верификации. Поэтому цоликлоны применяют только для первичного определения группы крови и резус-фактора и при экстренных показаниях трансфузии компонентов крови.

Подробнее о самой редкой группе крови в Мире можно найти здесь.

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

Что требуется для определения группы крови и резус-фактора?

цоликлон анти-А;

цоликлон анти-В;

цоликлон анти-D;

– раствор натрия хлорида 0,9 %; специальный планшет; стерильные палочки.

Алгоритм и порядок определения группы крови

Нанести цоликлоны анти-А, анти-В на специальный планшет по одной большой капле (0,1 мл), под соответствующими надписями.

Рядом с ними капнуть исследуемую кровь (0,01–0,03 мл) по одной маленькой капле. Перемешать их и наблюдать за наступлением или отсутствием реакции агглютинации в течение 3 мин. При сомнительном результате добавить 1 каплю 0,9% физиологического раствора.

 Расшифровка результатов определения группы крови

  • если реакция агглютинации наступила с анти-А цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе А (II);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-B цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе B (III);
  • если реакция агглютинации не наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе 0 (I);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе AB (IV), как показано на рисунке.

AB (IV)

Определение резус-фактора цоликлоном Анти-D

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D цоликлона и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови пациента. За наступлением реакции агглютинации или её отсутствием наблюдают в течение 3 мин.

  • если реакция агглютинации наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-положительной (Rh+)
  • если реакция агглютинации не наступила с цоликлоном анти-D, то исследуемая кровь относится к резус-отрицательной (Rh—)

AB (IV)Rh-

Другими словами, при смешивании цоликлона Анти-D с резус-положительными эритроцитами наступает реакция агглютинации, а если кровь резус-отрицательная — агглютинация отсутствует (как показано на рисунке — четвертая группа крови резус-отрицательная).

Определение групп крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками — поиск и обнаружение в крови антигенов А и В с помощью реакции агглютинации. Для достижения цели используют:

  • Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп крови О (I) — бесцветная, А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — жёлтая.
  • Белые тарелки, маркированные группами крови: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV).
  • NaCl 0,9%
  • Стеклянные палочки
  1. Подписать тарелку (Ф.И.О. пациента);
  2. Нанести обозначения двух серий стандартных сывороток I, II и III групп крови в объёме 0,1 мл, образующие два ряда по три капли слева направо: 0 (I), А (II), В (III);
  3. Забрать кровь из вены. Шесть капель исследуемой крови пациента перенести стеклянной палочкой на пластину в шесть точек рядом с каплей стандартной сыворотки и перемешать.

Агглютинация начнется через 30 сек. В те капли, где произошла агглютинация, добавить по одной капле NaCl 0,9% и оценить результат.

Оценка результатов определение группы крови стандартными сыворотками

Положительная реакция агглютинации может быть пескообразной или лепестковой. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать.

Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после наблюдения в течение 5 мин.

При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB (IV).

Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB (IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0 (I), А (II) и В (III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ (IV).

Определение группы крови перекрестным способом — обнаружение наличия или отсутствия в исследуемой крови антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также антител α и β с помощью стандартных эритроцитов. Реакцию со стандартными сыворотками проводят описанным выше способом.

Для реакции со стандартными эритроцитами необходимы стандартные эритроциты трёх групп крови: 0 (I), А (II), B (III).

Методика проведения реакции со стандартными эритроцитами

  1. Кровь для исследования берут из вены в пробирку, центрифугируют или оставляют на 30 мин для получения сыворотки.
  2. На маркированную тарелку наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки крови из пробирки, а рядом с ними по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.
  3. Соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют NaCl 0,9% и оценивают результат.

Оценка результатов проведения реакции со стандартными эритроцитами

Оценивают результаты, полученные со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами. Особенность результатов реакции со стандартными эритроцитами — эритроциты группы 0 (I) считают контрольными.

Результат перекрёстного способа считают достоверным, если при  реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают.

Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.

Источник: https://anest-rean.ru/gruppa-krovi/opredelenie/

Методы как определить группы крови (стандартными сыворотками, цоликлонами)

Современные методы определения группы крови

В современной медицине группа крови характеризует набор расположенных на поверхности эритроцитов антигенов, которые определяют их специфичность.

Существует огромное количество таких антигенов (обычно применяется таблица групп крови с разнообразными антигенами), но повсеместно производится определение группы крови с использованием классификации по резус-фактору и системе АВ0.

Определение группы является обязательной процедурой при подготовке к любой операции.

Такой анализ также необходим при поступлении на службу в некоторые контингенты, среди которых военные, работники внутренних органов и силовых структур.

Данное мероприятие проводится из-за повышенного риска возникновения состояния, угрожающего жизни человека, в целях сокращения времени, требуемого для оказания помощи в виде переливания крови.

Состав крови различных групп крови

Суть системы АВ0 состоит в наличии структур антигенов на эритроцитах. В плазме нет соответствующих им типовых антител (гамма-глобулинов). Поэтому для исследования крови можно использовать реакцию «антиген + антитело».

Эритроциты склеиваются в момент встречи антигена и антитела. Подобная реакция носит название гемагглютинации. Реакция отображается в виде небольших хлопьев при проведении анализа. Исследование основано на получении изображения агглютинации с сыворотками.

Связываются антигены эритроцитов «А» с антителами «ά», а также «В» с «β» соответственно.

Выделяются следующие группы крови по составу:

  • I (0) – ά, β — поверхность эритроцитов совсем не содержит антигенов,
  • II (А) – β — на поверхности имеется антиген А и антитело β,
  • III (В) – ά — поверхность содержит В с антителом типа ά,
  • IV (АВ) – 00 — поверхность содержит оба антигена, однако не имеет антител.

Определение групп крови

Антигены есть у зародыша уже в состоянии эмбриона, а агглютинины (антитела) появляются на первом месяце жизни.

Стандартный метод

Существует множество техник, однако в лаборатории обычно используют определение с помощью стандартных сывороток.

Метод по стандартным сывороткам используется для определения типов антигенов АВ0. Состав стандартной изогемагглютинирующей сыворотки содержит набор антител к молекулам эритроцитов. В случае наличия антигена, который подвержен действию антител, формируется комплекс антиген-антитело, что запускает каскад реакций иммунитета.

Результатом данной реакции является агглютинация эритроцитов, на основании характера происходящей агглютинации можно определить принадлежность образца к какой-либо группе.

Для приготовления стандартной сыворотки используется донорская кровь и определенная система — посредством выделения плазмы, включающей антитела, и последующего ее разведения. Разведение выполняется с использованием изотонического раствора натрий хлорида.

Разведение производится так:

  • В пробирку, содержащую 1 миллилитр 0.9 %-го раствора пищевой соли, необходимо добавить 1 миллилитр плазмы. Раствор тщательно перемешать.
  • Затем пипеткой отбирают полученный раствор плазмы в объеме 1 миллилитр. Добавляют его в пробирку, которая содержит изотонический раствор. Так необходимо достигнуть разведения плазмы с соотношением 1 к 256. Применение других разведений несет риск возникновения диагностической ошибки.

Непосредственно исследование проводится таким образом:

  • На специальный планшет помещают по капле каждой сыворотки (общим объемом примерно 0.1 миллилитр) на участок, где имеется соответствующая пометка (применяются 2 образца, из них один – контрольный, второй предназначен для исследования).
  • Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают исследуемый образец в объеме 0.01 миллилитра, после чего его по отдельности смешивают с каждым диагностикумом.

Правила расшифровки результатов

Спустя пять минут можно производить оценку результатов исследования. В больших каплях сыворотки происходит просветление, в одних наблюдается реакция агглютинации (образуются мелкие хлопья), в других – нет.

: Определение группы крови и резус-фактора

Здесь возможны варианты:

  • Если реакции агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками II и III (+ контрольные 1 и IV) — определение первой группы,
  • Если свертывание наблюдается во всех пробах, кроме II — определение второй,
  • При отсутствии реакции агглютинации только в пробе с III группы — определение III,
  • Если свертываемость наблюдается во всех пробах, в том числе в IV-контрольной — определение IV.

Когда сыворотки располагаются в правильном порядке и на тарелке стоят подписи, ориентироваться легко: группа соответствует местам с отсутствующей агглютинацией.

В некоторых случаях склеивание неясно различимо. Тогда анализ необходимо переделать, мелкую агглютинацию наблюдают под микроскопом.

Определение группы крови цоликлонами

Цоликлоны — синтетические заменители сывороток, которые содержат в своем составе искусственные заменители агглютининов типов ά и β. Они называются эритротестами «Цоликлон анти-А» (имеют розовый цвет), а также «анти-В» (имеют синий цвет). Ожидаемая агглютинация наблюдается между агглютининами цоликлонов и эритроцитами крови.

Цоликлоны

Данная методика не требует двух серий, она является более надежной и точной. Проведение исследования и оценка его результатов происходят так же, как и в стандартном методе.

Вид цоликлоновГруппа крови
Результат агглютинацииАнти-ААнти-В
0(I)
+A(II)
+B(III)
++AB(IV)

IV группа (АВ) обязательно подтверждается агглютинацией с цоликлоном «анти-АВ», а также отсутствием склеивания эритроцитов в изотоническом растворе натрия хлорида.

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Хотя общепринятые способы определения принадлежности крови к конкретной группе распространены повсеместно, в современной медицине происходит внедрение экспресс-методов, самым распространенным из которых является “Эритротест”.

При определении группы с применением методики “Эритротест группокарт” необходим комплект инструментов, включающий следующие приборы:

  • Планшетка, имеющая с пять лунок, для произведения определения группы по ее резус-принадлежности и системе АВ0,
  • Скарификатор, предназначенный для получения образца, необходимого для исследования,
  • Стеклянные палочки для перемешивания образцов,
  • Чистая пипетка для набора растворов.

Все перечисленные инструменты необходимо для безошибочного проведения диагностики.

Набор для анализа крови “Эритротест-группокарт” позволяет проводить исследование резус-фактора и определение группы крови в любых условиях, она особенно эффективна при отсутствии возможности использования общепринятых методов.

В лунках на планшетке расположены цоликлоны к антигенам (это цоликлоны анти-А, -В, -АВ) и к основному антигену, который обуславливает наследование резус-фактора (это цоликлон анти-D). Пятая лунка содержит контрольный реагент, который позволяет предотвратить возможные ошибки и грамотно определить принадлежность к группе крови.

: Определения групп крови с помощью цоликлонов

Загрузка…

Источник: https://KardioBit.ru/krov/metody-opredeleniya-gruppy-krovi

Методики определения групп крови, описание таблицы

Современные методы определения группы крови

Практически каждый человек хотя бы единожды за свою жизнь проходил тест для установления принадлежности группы крови. О методах проведения данного анализа и об их достоверности пойдет речь далее.

Для чего проводится диагностика?

Группа крови – это определенный ряд антигенов, размещенных на поверхности эритроцитов, которые и определяют их специфичность. Таких антигенов известно очень много, поэтому принято единую классификацию крови по АВО и резус-фактору.

Этот показатель в обязательном порядке определяется у пациентов перед хирургической операцией, военным, полицейским и другим категориям людей, которые могут потребовать срочного переливания крови.

Стандартная методика определения группы крови

Самый распространенный метод исследования данного показателя – это способ с применением стандартной сыворотки. Эта диагностика определяет общепринятые антигены по системе АВО.

Изогеммагглютинирующая сыворотка представляет собой совокупность специальных антител к наружным частичкам эритроцитов.

Если находится совместимый антиген, на который могут воздействовать антитела, то формируется комплекс, способствующий началу иммунно-защитного механизма.

Вследствие этого происходит склеивание эритроцитарных клеток крови (агглютинация). Если подобное происходит, то делается вывод о несовместимости крови.

Данные сыворотки изготавливаются из крови доноров по специальной системе, подразумевающая под собой извлечение плазмы, в которой и содержать антитела, после чего ее разводят изотоником – хлорид натрия, это проходит в несколько этапов:

  • В емкость наливают 1 мл воды, в которой растворено 0,9% обычной соли.
  • В эту же пробирку вносят такое же количество разведенной плазмы.
  • Затем 1 мл данной жидкости вносят в емкость с изотоником.

Процесс позволяет получить соотношение 1:256. Если методика разведения будет нарушена, то есть большая вероятность получения ошибочных результатов.

Проведение исследования

На поверхность планшета наносится 0,1 мл каждой сыворотки в район, где нанесена нужная пометка. За тем берется исследуемая кровь объемом 0,01 мл для каждого образца. И затем проводится смешивание каждой капли сыворотки с кровью.

Спустя пять минут проводят диагностику. Тестирование считается положительным, если прошла реакция агглютинации. Исходя из результатов анализов, выполняется построение таблицы, в которую они и заносятся.

Таблица результатов теста на группу крови с применением стандартных сывороток.

Методика перекрестных реакций

В этом случае, чтобы определить агглютиноген используют цоликлоны. Иначе стандартные сыворотки с технологией параллельного выяснения благодаря эталонным эритроцитарным клеткам.

Два этих способа весьма сходны между собой. Но различия все, же есть.

На поверхность, на которую предварительно помещаются различные сыворотки, наносят по небольшой капле обычных эритроцитов. Затем кровь разделяют на фракции при помощи центрифуги. И форменные элементы добавляют к стандартным сывороткам, а плазменную часть – к стандартным эритроцитарным клеткам. Оценивание результатов проводят через пять минут и показатели отмечают в таблице.

Благодаря данной методике исключаются ошибки при исследовании.

Метод с использованием цоликлонов

Если нет возможности определить группу крови стандартными сыворотками, то используют данную методику.

Цоликлоны – гибридные антитела, которые получают из в-лимфоцитов крови мышей.

Последовательность проведения диагностики такая:

  1. После нанесения отметок на планшет, которые соответствуют виду цоликлона, наносится раствор.
  2. К каждому образцу цоликлона вносят одну каплю диагностированной крови.
  3. Оценка результатов через пять минут.
  4. Для данной методики необходимо соблюдать специальные условия. Они включают в себя пригодность цоликлонов, температуру в помещении и уровень влажности.

Результаты анализов считаются позитивными в том случае, когда при смешивании данных фракций наблюдается реакция агглютинации. Если подобное произошло в двух образцах, то считается, что кровь относится к четвертой группе. Если реакция не наблюдается вовсе, то к первой. Диагностические ошибки в данной методике встречаются не часто.

Быстрый способ «Эритротест»

Выше перечисленные способы используются в медицине уже долгое время и распространены по всему миру. Но ввиду того, что отрасль постоянно развивается, вводятся быстрые диагностические методы по установлению принадлежности к группе крови. Таким нововведением считается и «Эритротест».

Чтобы определить показатель данным способом необходимо иметь следующее оборудование:

  • Стандартный планшет с пятью лунками
  • Скарификатор для прокола и получения биологической жидкости
  • Стеклянная пипетка с резиновой грушей
  • Пипетка для забора реактивов
  • Палочки для смешивания компонентов

Основное преимущество эритротеста состоит в том, что исследование не требует дополнительных условий и доступно в тот момент, когда проведение стандартной диагностики невозможно.

Последовательность проведения

В углублениях планшета размещают цоликлоны к антигенам поверхностного типа и основному, который отвечает за наследственную передачу резус-фактора.

В последнюю лунку добавляют контрольную сыворотку, которая исключит ошибочный результат и верно укажет на принадлежность к той или иной группе.

Оценивание результатов анализа проводится с помощью таблицы, в ней указываются возможные результаты тестирования.

Классификация по системе АВО

Группа крови, определение ее проводится исходя из специально разработанных норм. Существует определенная таблица, которая характеризует каждую группу крови.

ГруппыОписание
I (0)Эритроцитарные антигенные качества не наблюдаются
II (А)Присутствие антигена А
III (В)Наличие на поверхности эритроцитарных клеток антигена В
IV (АВ)Присутствие обоих антигенов

: Методы определения групп крови:

Источник: https://sosudask.ru/gruppa-krovi-opredelenie/

УмныйКардиолог
Добавить комментарий